Мікроскопічний аналіз молочка (Шовен, 1956) також дає чіткі дані. Треба до аналізованого молочка додати трохи крапля лугу, тоді воно стає прозорим і добре видні зерна пилку, шкурки личинок, віск. Еслн аналізується трутневое молочко, то в поле зору перебуває дуже багато пилку, обривків трахеї (звичайно фальсифікують, роздавлюючи трутневие личинки), а також пильцевих зерен.
Найбільш простий спосіб визначення істинності молочка був випробуваний у Ленінградській області на молочку місцевих північних бджіл, а також на молочку, отриманому нами в травні 1963 р. у Сочі
, Випробуванню зазнав уміст трутневих і робочих гнізд у порядку контролю. При перевірці молочка цим способом слід користуватися хімічно чистим посудом і точними чистими реактивами. Зводиться він до наступного:.
1) переносять 32 мг маткового молочка в маленьку склянку ємністю 25 мол;.
2) додають 10 мол охолодженої кипяченої води й заважають чистою стерильною скляною паличкою протягом 5-■ 7 хвилин;.
3) 2 мол такого водяного розчину відсмоктують піпеткою й переносять у пробірку, куди додають 1 мол 20%-ний сірчаної кислоти, знову добре перемішують і вносять 1 краплю (0,04 мол) Vio-Нормального розчину перманганату калію. Якщо молочко дійсне, то знебарвлення настане швидко —> через 2—4 секунди. Відбувається це тому, що в матковому молочку є ненасичена карбонова кислота — декагидроокси-д 2-
кислота; вона-те й окисниться перманганатом калію (табл. 6).
Свіже чисте молочко, збережене при — 2° і розведене в 10 раз, дало кольорову реакцію із КМпС>4, яка зникла через 5—4 секунди. (Дата одержання молочка — 18 липня, із гнізда була вилучена личинка 3-го дня).
Свіже чисте молочко, вилучене із гнізда, де перебувала личинка 2-го дня, втратило свою реакцію через 2 секунди.
Старе молочко у вигляді таблеток із глюкозою, що зберігалося 12 місяців, дало фарбування із КМпС>4, яка не зникла протягом години. При перевірці на експериментальні тварин молочко виявилося непридатним.
Ми зробили також перевірку змішувача на реакцію, тобто брали глюкозу й цукрову пудру в тих же розведеннях; кольорова реакція зявлялася й не зникала, отже, ці змішувачі не дають реакції окиснення із КМп04. Таблетки апілаку з молочним цукром, збережені при +8° протягом 5 місяців, були розведено 1:10 у дистильованій воді, вони також показали кольорову реакцію, яка зникла через 5—10 секунд, тобто молочко було придатним.
Свіже чисте молочко, збережене при —2, а потім перенесене на 3 години зберігання при +28° і на 2 дня при +12, дало також кольорову реакцію, але фарбування зникало повільніше — тільки через 40 секунд. Свіже молочко, збережене при, —2° протягом двох тижнів, а далі доба при температурі +23, було розведено в 10 раз дистильованою водою; воно дало фарбування із КМПО4, яка зникала через 4—11 секунд, тобто молочко при зберіганні при температурі +23° за добу не змінилося.
Далі були випробувані свічі, що зберігалися протягом роки при температурі —2°. Вони показали кольорову реакцію, яка зникала, як і у свіжого молочка, через 3-4 секунди.
Нами також зроблена перевірка змішувача на реакцію. Молочний цукор постійно давав зникаючу кольорову реакцію. Тому зручніше в якості змішувача вживати глюкозу.
Цей спосіб при хімічно чистих реактивах доступний у лабораторній обстановці при кімнатній температурі. Існує ще спосіб визначення істинності маткового молочка по Брайнесу, він, однак, вимагає дорогої установки, а тому його важко проводити в умовах скромної лабораторії.
1) беруть 5 мол водяного розчину маткового молочка (1:10) і розбавляють 20 мол дистильованої води.
2) отриманий розчин відстоюють 1 година або центрифугують 10 хвилин (2-3 тисячі оборотів в 1 хвилину на сильній центрифузі).
3) переносять розчин у пробірку з нефлюоресцирующего скла, яку встановлюють на шляху променів ртутнокварцевой лампи з фільтром УФС-3, що пропускають в основному ультрафіолетові промені із длйной 366 миллимикронов.
4) у темній кімнаті розчин, поміщений перпендикулярно ходу ультрафіолетових променів, дає яскраву світло-блакитну флюоресценцію, якщо маткове молочко дійсне.
Флюоресценція маткового молочка залежить від наявності биоптерина в ньому.